子宮內(nèi)膜異位癥動物模型實(shí)驗(yàn)分組

造模前,每日定時(shí)對所有小鼠進(jìn)行陰道脫落細(xì) 胞涂片(美藍(lán)染色法),連續(xù)觀察兩個(gè)動情周期,選 取動情周期規(guī)律的小鼠用于實(shí)驗(yàn)。 90 只實(shí)驗(yàn)小鼠 中 48 只用于子宮內(nèi)膜異位癥模型建立,32 只作為 假手術(shù)組,另外 10 只作為空白對照,用于模型對比 鑒定。 用于模型建立的 48 只小鼠按照 1 ∶ 2的比例 隨機(jī)分為供體鼠 16 只和受體鼠 32 只。 32 只受體 小鼠隨機(jī)分為 4 組,每組 8 只,分別為種植后 1 周 組、種植后 2 周組、種植后 4 周組和種植后 6 周組。

子宮內(nèi)膜異位癥動物模型 建模方法

所述模型的建立方法,按如下步驟操作:

(1) 注射雌激素:所有實(shí)驗(yàn)小鼠(包括供體鼠和 受體鼠) 頸背部皮下注射苯甲酸雌二醇溶液 150 μg / kg,每 4 天注射 1 次,共注射兩次。

(2) 從注射雌激素開始至腹腔種植當(dāng)日,每日 定時(shí)對供體鼠和受體鼠進(jìn)行陰道脫落細(xì)胞涂片檢 查,觀察小鼠動情周期。 動情周期判斷依據(jù)如下: 動情前期:圓形或橢圓形的有核上皮細(xì)胞為主,夾 有少量角化細(xì)胞和白細(xì)胞;動情期:幾乎全是無核 的角化細(xì)胞;動情后期:角化細(xì)胞減少,出現(xiàn)有核上 皮細(xì)胞和白細(xì)胞;動情間期:細(xì)胞少而皺縮,白細(xì)胞為主。

(3) 種植前標(biāo)本準(zhǔn)備:供體小鼠的子宮取出用 預(yù)冷的生理鹽水清洗血液和粘液,將子宮一分為二 分別放入盛有 0. 5 mL 預(yù)冷的 RPMI1640 培養(yǎng)基的 培養(yǎng)皿中,用眼科剪將子宮縱向剖開,剝離子宮內(nèi) 膜層并迅速將其剪成體積 ≤ 1 mm 3 的內(nèi)膜碎片制 成懸浮液備用。

(4) 腹腔注射內(nèi)膜:受體小鼠腹部皮膚消毒后, 以 1 mL 注射qi針筒接 20 mL 注射器針頭,以小鼠下 腹部正中尿道口上方 0. 5 cm 處為進(jìn)針點(diǎn),將子宮內(nèi) 膜碎片注射入受體小鼠腹腔,針孔處涂抹適量青霉 su軟膏預(yù)防感染,供體鼠與受體鼠數(shù)量比為 1 ∶ 2。 從取出供體小鼠子宮到注射子宮內(nèi)膜碎片入受體 小鼠所有操作應(yīng)在 5 min 內(nèi)連續(xù)完成,全程保持無 菌。 假手術(shù)組注射雌激素的方法與模型組相同,不 同的是,假手術(shù)組腹腔注射的是等體積的供體小鼠 的腹腔脂肪組織。

(5) 種植后處理:腹腔種植內(nèi)膜當(dāng)日開始對受 體小鼠頸背部皮下注射苯甲酸β-雌二醇溶液 150 μg / kg,每 4 天注射 1 次,共注射兩次,之后待內(nèi)膜自 然生長。